Técnicas de Edición Genómica en Asma

Técnicas de Edición Genómica:

Los TLR son una familia de receptores que median el reconocimiento de patógenos en el sistema inmunológico. 
En el sistema respiratorio, la activación de TLR tiene efectos tanto beneficiosos como perjudiciales en el asma. 
TLR6 ejerce efectos protectores en el asma. Los ratones Tlr6 con asma inducida por antígenos de hongos o HDM mostraron una hiperreactividad de las vías respiratorias sustancialmente mayor, inflamación, y la remodelación en comparación con los grupos asmáticos WT. 
Sorprendentemente, los niveles en todo el pulmón de IL-23 e IL-17 fueron notablemente más bajos en Tlr6 en comparación con los ratones asmáticos WT. Se demuestra que la activación de TLR6 es crítica para la producción de IL-23 y las respuestas Th17, que regulan la respuesta inflamatoria alérgica en el asma crónica inducida por hongos . Por lo tanto, las terapias dirigidas a la actividad de TLR6 podrían resultar eficaces en el tratamiento del asma clínico.

Referencia: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/22005301

Terapia Regenerativa o Terapia Celular o Terapia con Stem Cells

Terapia Regenerativa o Terapia Celular o Terapia con Stem Cells del Asma 

La administración intratraqueal de derivadas de tejido adiposo mesenquimales madre células alivia crónica asma en un ratón modelo 

Tipo Stem Cells: Las células madre mesenquimales derivadas de tejido adiposo (ASCs)  

USOS: ASCs ejercen funciones inmunomoduladoras en el asma  

OBTENCIÓN: Las ASC murinas (mASCs) se aislaron de ratones Balb / c machos y se identificaron mediante la expresión de marcadores de superficie mediante citometría de flujo. Se estableció el modelo de ratón asmático sensibilizado con OVA y luego los animales se trataron con las mASC mediante administración intratraqueal .  

RESULTADOS: Las mASCs crecieron por adherencia con la morfología similar a fibroblastos, y mostraron la expresión positiva de CD90, CD44 y CD29, así como la expresión negativa de CD45 y CD34, lo que indica que las mASCs se aislaron con éxito. La administración de mASCs a animales modelo asmáticos a través del suministro intratraqueal redujo la capacidad de respuesta de las vías respiratorias , el número de linfocitos (P <0.01) y la expresión de lgE (P <0.01), IL-1β (P <0.05), IL-4 (P <0.001) , e IL-17F (P <0.001), así como también aumentaron los niveles séricos de IL-10 y Foxp3, y el porcentaje de CD4 + CD25 + Foxp3 + Tregs en el bazo, y redujo la expresión de IL-17 (P < 0.05) y RORγ. 

Transgénicos en el Asma

Transgénicos en el Asma

 Se crearon ratones knockout de FcɛR1 y esto evitó que los ratones asmáticos desarrollaran hipotensión; ratones knock-down de miR-212-5p en  ratones asmáticos resultaron en una restauración significativa de la presión arterial.

Referencias:
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/28988887

ADN recombinante en el Asma

ADN recombinante Natural:  Desoxirribonucleasa humana recombinante (rhDNasa) provoca que el ADN extracelular sea cortado. Su función ayuda a disminuir la resistencia de las fías respiratorias, reduce la producción de moco, etc.

ADN recombinante Artificial: La producción de ARN de interferencia, produciendo un silenciamiento del ARNm en su extremo 3 no traducido.

REFERENCIAS:
https://www.cochrane.org/es/CD001127/desoxirribonucleasa-humana-recombinante-para-la-fibrosis-quistica
https://www.msdmanuals.com/es-pe/hogar/trastornos-del-pulm%C3%B3n-y-las-v%C3%ADas-respiratorias/asma/asma

Microarray en Asma

Microarray en Asma

1.Tema: Fenotipos del asma grave del adulto: las claves para la medicina personalizada 

2. Objetivo: Mejorar nuestra comprensión de los mecanismos que subyacen la respuesta a uno u otro tratamiento en los pacientes con asma

3. Muestras: cultivos de células epiteliales obtenidas por cepillado bronquial

4. Tipo de ácido nucléico a ser extraido: ADN genómico

5.Anáisis de Microarray: se analizó mediante microrray y PCR

6. Resultados: . Se encontró que aproximadamente el 50% de los pacientes tenían una expresión TH2 bajo, similar a la de los controles sanos. Los asmáticos Th2alto tenían mayores cantidades de IL-13, IL-5 y más eosinófilos, mastocitos y más atopia y remodelado

Referencia: http://www.alergoaragon.org/2017/0103.pdf

Reacción en Cadena de la Polimerasa en Asma

1TEMA: Asociación entre polimorfismos genéticos de la interleucina 6 y el asma bronquial en niños

2. Objetivo: Analizamos los polimorfismos del gen promotor de la interleucina 6 en pacientes con asma bronquial y niños sanos mediante el análisis de polimorfismos en la longitud de los fragmentos de restricción amplificados por reacción en cadena de la polimerasa.

3. Muestras: Muestras de sangre venosa en tubos recubiertos de ácido etilendiaminotetraacético

4. Tipo de ácido nucléico a ser extraido: ADN genómico

5. Gen o secuencia a amplificar:

Genes:

·        IL-6 -174G/C

·        IL-6 -572G/C

Sitios de SNP

·        rs1800795F

·        rs180095R

·        rs180096F

·        rs180096R

6. Tipo de PCR: PCR-RFLP

7. Extracción: Wizard^® Genomic DNA purification Kit 

8. Visualización: bromuro de etidio
9. Sensibilidad y Especificidad: 

Sensibilidad (100.0%) y especificidad. (100.0%) para el genotipado de SNPs.

REFERENCIA:https://www.archbronconeumol.org/es-asociacion-entre-polimorfismos-geneticos-interleucina-articulo-S0300289616302551

Prueba de Tamizaje y Confirmatoria para el Asma

Prueba de Tamizaje y Confirmación para el Asma:

 Encontramos que la prueba confirmatoria mas importante va a ser la espirometría que nos permite medir los volúmenes y flujos pulmonares de la espiración máxima voluntaria, ya sea esta simple o forzada.  Entre las pruebas de tamizaje encontraremos una serie de exámenes como el Phadiatop® , la IgE total, la IgE específica, otras como la Eosinofilia que solo se realizaría si alguna de las mencionadas anteriormente no fuese exclaratoria. La determinación de IgE específica frente a uno o varios alergenos, permite cuantificar in vitro la sensibilización a estos, Es capaz de identificar niveles muy bajos de IgE especifica, desde 0,35 kUi/L hasta 100 kUi/L.

Referencias:http://www.respirar.org/index.php/respirar/formacion-continuada/taller-de-diagnostico-de-alergia/modulo-3-diagnostico-in-vitro